Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐引入

从第一次再次出有现家兔自身HIV到再次出有现1DF高血压临床研究病症的实质性不下在学童以前就有更好的阐述，多个家兔自身HIV白血病的学童里面有70%在血清转换后10年内患上高血压，而随访15年的学童这一比率缩减到84%。相比之下之下，占临床研究1DF高血压一半以上的DF1DF高血压的发病机制还没有获取合理的研究课题。

更多的人开始使用分期系统对来定义1DF高血压的实质性：个形体在再次出有现多种家兔自身HIV时重回第1先决条件，再次出有现浓度异常时重回第2先决条件，再次出有现病症时重回第3先决条件。一些多发家兔自身HIV白血病的个形体，在1期和2期，实质性较慢，并发展为发病的1DF高血压。我们之前阐述了一小组在首次监测到多种家兔自身HIV样本后至少10年无高血压的却是慢实质性者，这小组病患者伤亡人数少，但形态非常明确。随后，我们发现家兔自身抗原抗原CD8+T肝细胞反应在实质性平稳的病患者里面基本不实际上，但在更实质性发病和经常性实际上的高血压病患者里面很容易监测到。这可能表明，与实质性病患者相比之下，这些病患者性疾病反应的平衡增强。

早期研究课题表明，尽管平衡性T肝细胞(Treg)数量正常，但高血压病患者实际上一些功用不足之处，其里面除此以外对IL-2的反应意志力提高。此外，高血压病患者里面的震荡CD4+T肝细胞可能对平衡更具抵抗性，乏善可陈为震荡T肝细胞的减缓减弱，自然产生的Treg和形体外产生的游离Treg，以及抗原经历的CD4+T肝细胞里面IL-2反应减弱。本研究课题的目的是阐述了CD4+平衡性T肝细胞(Treg)在一小群却是平稳实质性者里面的形态，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以许多人依此的纵向研究课题，在21岁以下确诊的病患者亲属里面检查1DF高血压的危险诱因。我们之前阐述了经常性平稳实质性者的形态，他们保持一致多重家兔自身HIV白血病超过10年，但没有再次出有现高血压的临床研究病症，慢性或非同步进行性性疾病。随后，10名继续保持一致无高血压并愿意提供大量血液样本的平稳实质性者纳入T和B肝细胞功用分析。在目前的研究课题里面，8名慢实质性者(SP小组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身HIV白血病。所有的参与者都位处1DF高血压实质性的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身HIV对某些抗原的白血病反应，然而，一名病患者已经位处2期至少6年，但没有再次出有现临床研究病症，一名病患者被诊断为高血压，该受试者72岁，在采集试验样本时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据分析里面对该丝氨酸同步进行了单独分析报告。分离外周血单个核肝细胞(PBMCs)，转用多常量流式肝细胞术和T肝细胞减缓测试分析报告丝氨酸里面Treg的Hz、表DF和功用。使用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、连续性和回归)同步进行无监督聚类分析，分析报告Treg表DF。

结果：与心理健康丝氨酸相比之下，来自慢实质性形体的清醒CD4+T肝细胞的监督聚类标示出有，诱导的清醒CD4+ TregHz缩减，与持续性游离的TNFR方面细胞(GITR)理解缩减有关。一名HbA1c上升的病患者与实质性平稳者和给定的对照小组相比之下，Treg谱有所有所不同。功用分析表明，与心理健康丝氨酸相比之下，来自平稳实质性形体的Treg介导的CD4+震荡T肝细胞减缓明显受损。乏善可陈为对震荡CD4+T肝细胞CD25和CD134理解的减缓缩减。

上图1 深入的表DF分析标示出有，CD4+Treg亚DF在慢实质性路由表里面缩减。由FlowSOM转换成的Treg一楼，聚集在来自所有丝氨酸的来时CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标示出有物理解鉴别出有10个元簇:清醒T肝细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T肝细胞;HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)使用9个有所不同Treg标示出有转换成的10个元簇的MST。每个终端代表一个一个大(100个一个大)，更大的元一个大(10个元一个大)在终端小组附近着色。每个终端里面的饼上图透露单个标示出有的理解级别。(b)每个元聚类的热上图，以标示出有整形体标示出有理解。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)转换成上图，以及FlowSOM定位的每个元簇的覆盖物。(e-l)相比总质量为每个metacluster罐上图表(总质量> 0.05%)确定为HD和SP小组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T肝细胞(l)。红色左上角代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon分小组符号秩化验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 使用CITRUS的预测模DF确认，TregHz的缩减是实质性平稳的图标。分级制度门控(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP参与者和给定的HD参与者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的代表性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3硫化物，然后通过HLA-DR和GITR理解同步进行分离，模拟FlowSOM社会性。(b) HD(黑斑)和SP(杂色)小组以及丝氨酸SP 606(红色)里面CD25+ cd127的Hz汇总上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控有界的罐上图表;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度着色，箭头突出有的簇被定位为SP和HD路由表之间的有所不同。(j)罐上图表标示出有了在SP(杂色)和HD(灰点)小组里面，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相比总质量(比率)。(k)概不下分布标示出有每个簇的表DF(粉红色)和Treg标示出有相比理解与背景理解(红色);上列，磁盘Treg_3;下面一行，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇里面标示出有的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon分小组符号秩化验

上图3 与心理健康献血者相比之下，实质性平稳者清醒treg的GITR缩减。每个清醒CD4+T肝细胞元簇(清醒T肝细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T肝细胞;HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个理解标示出有的转变。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的理解热上图(sp606不除此以外在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR理解串联，标示出有概不下分布(c)和汇总上图(d)。Wilcoxon分小组符号秩和化验，p< 0.07(红色)所有丝氨酸除此以外，p< 0.05(红色)丝氨酸SP 606和给定的HD不除此以外在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR理解，从分级制度门控，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(红色)串联，标示出有概不下分布(e)和汇总上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon分小组符号秩化验

上图4 来自平稳实质性的CD4+ treg肝细胞压制震荡CD4+T肝细胞的意志力提高。SP小组用红色的两条路线和左上角透露，HD小组用白色的两条路线和左上角透露，红色的两条路线/左上角透露丝氨酸sp606。使用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞同步进行分选。CD4+CD25−(转发者)被标示出有为CFSE, Treg按观察的比率试样。用抗CD3 /28微珠来时化肝细胞，培训3在此之后同步进行流式肝细胞术监测。(a-d)与CD4+转发者相比应的treg培训(诱导)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培训。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE减缓百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓百分比。使用白血病对照(诱导的鼓动肝细胞不含treg)计算减缓百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 震荡CD4+T肝细胞对平稳实质性的T肝细胞来时化的减缓更敏感。SP小组用红色的两条路线和左上角透露，HD小组用白色的两条路线和左上角透露，红色的两条路线/左上角透露丝氨酸sp606。使用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞同步进行分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标示出有，treg按观察的比率试样。用抗CD3 /28微珠来时化肝细胞，培训3在此之后同步进行流式肝细胞术(CD25反染)和肝细胞因侄分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者协同培训。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE减缓次之(b)。(c,d) CD25减缓次之(c)和CD134减缓次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训里面的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们推论的论点是，来自平稳实质性侄的来时化清醒CD4+Treg在GITR理解里面获取了扩展和丰富，强调了实质性研究课题Treg在1DF高血压高风险个形体里面的异质性的必要性。

标题出有处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28