Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者实质性缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现去甲自身突变到显现1M-高血压药理学病症的方面率在成人时期就有很好的详细描述，多个去甲自身突变不同之处性的成人中都有70%在血清转换后10年内患上高血压，而随访15年的成人这一数目上升到84%。相比之下于之下，分之一药理学1M-高血压一半以上的M-1M-高血压的发作功用还很难得到更不足之处的归纳。

更加多的人开始用作分期系统来度量1M-高血压的方面：社会阶层在显现多种去甲自身突变时带入第1过渡期，显现躯温极其时带入第2过渡期，显现病症时带入第3过渡期。一些多发去甲自身突变不同之处性的社会阶层，在1期和2期，方面较快，并发展为发作的1M-高血压。我们早先详细描述了一第一组在首次测定到多种去甲自身突变样品后多于10年无高血压的极快方面者，这第一组病患者人数少，但不同之处并不具体。随后，我们发现去甲自身特异性特异性CD8+T新线粒躯中间躯该在方面缓快的病患者中都理论上不存在，但在早先发作和长期存在的高血压病患者中都很容易测定到。这确实说明了，与方面病患者相比之下于，这些病患者胃溃疡中间躯该的调控增强。

以前新发现，尽管调控性T新线粒躯(Treg)数量正常，但高血压病患者存在一些功用缺陷，其中都都有对IL-2的中间躯该潜能减缓。此外，高血压病患者中都的畸变CD4+T新线粒躯确实对调控更加具抵抗性，乏善可陈为畸变T新线粒躯的游离增强，自然导致的Treg和躯外导致的游离Treg，以及特异性境遇的CD4+T新线粒躯中都IL-2中间躯该增强。本归纳的目的是详细描述了CD4+调控性T新线粒躯(Treg)在这群人极缓快方面者中都的不同之处，他们的总人数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX归纳是一项以人群为基础的横向归纳，在21岁一般而言住院的病患者亲戚中都检查1M-高血压的凶险因素。我们早先详细描述了长期缓快方面者的不同之处，他们保持多重去甲自身突变不同之处性超过10年，但很难显现高血压的药理学病症，快性或非来进行性胃溃疡。随后，10名继续保持无高血压并愿意都有大量血液样品的缓快方面者纳入T和B新线粒躯功用归纳。在目前的归纳中都，8名快方面者(SP第一组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的去甲自身突变不同之处性。所有的与会者都所处1M-高血压方面的1期，尽管一些人随后失掉了去甲自身突变对某些特异性的不同之处性中间躯该，然而，一名病患者已经所处2期多于6年，但很难显现药理学病症，一名病患者被诊断为高血压，该实验者72岁，在采集实验室样品时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳中都对该NADP来进行了实际上评估。转化外周血单个质子新线粒躯(PBMCs)，有别于多参数流式新线粒躯心法和T新线粒躯游离试验评估NADP中都Treg的kHz、表M-和功用。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、比如说和紧接)来进行无督导聚类归纳，评估Treg表M-。

结果：与健康NADP相比之下于，来自快方面躯的失忆CD4+T新线粒躯的督导聚类显示，激光阴的失忆CD4+ TregkHz上升，与糖皮质激素游离的TNFR相关细胞(GITR)暗示上升有关。一名HbA1c升高的病患者与方面缓快者和也就是说的对照第一组相比之下于，Treg序有所有所不同。功用新发现，与健康NADP相比之下于，来自缓快方面躯的Treg介导的CD4+畸变T新线粒躯游离明显受损。乏善可陈为对畸变CD4+T新线粒躯CD25和CD134暗示的游离上升。

所示1 深入的表M-归纳显示，CD4+Treg非典M-在快方面队列中都上升。由FlowSOM分解的Treg室，聚集在来自所有NADP的光阴CD4+CD45RA -新线粒躯上。根据标示借助于物暗示鉴定借助于10个元簇:失忆T新线粒躯_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T新线粒躯;HLA-DR + GITR +失忆T新线粒躯;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)用作9个有所不同Treg标示借助于分解的10个元簇的MST。每个终端代表一个集群(100个集群)，更加大的元集群(10个元集群)在终端第一组周边手工。每个终端中都的饼所示指出单个标示借助于的暗示级别。(b)每个元聚类的热所示，以显示整躯标示借助于暗示。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)分解所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比之下总质量为每个metacluster盒新线所示(总质量> 0.05%)确定为HD和SP第一组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T新线粒躯(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T新线粒躯(l)。绿色橘色代表这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon以此类推大写字母秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用作CITRUS的预测模M-确认，TregkHz的上升是方面缓快的标志。分级门控(a - f)和柑橘归纳(g-k)较为SP与会者和也就是说的HD与会者在CD4+CD45RA−T新线粒躯上的相似之处。(a)互补CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的代表性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3硫化物，然后通过HLA-DR和GITR暗示来进行转化，实时FlowSOM社会阶层。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第一组以及NADPSP 606(绿色)中都CD25+ cd127的kHz概要所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控弟集的盒新线所示;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)油菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度着色，箭头突借助于的簇被识别为SP和HD队列两者之间的有所不同。(j)盒新线所示显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)第一组中都，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相比之下总质量(数目)。(k)直方所示显示每个簇的表M-(暗红色)和Treg标示借助于相比之下暗示与背景暗示(白色);上列，磁盘Treg_3;下面一行，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇中都标示借助于的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon以此类推大写字母秩检验

所示3 与健康献血者相比之下于，方面缓快者失忆treg的GITR上升。每个失忆CD4+T新线粒躯元簇(失忆T新线粒躯_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T新线粒躯;HLA-DR + GITR +失忆T新线粒躯;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个暗示标示借助于的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的暗示热所示(sp606不都有在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中都所有HD(紫色)、所有SP(白色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR暗示联结，显示直方所示(c)和概要所示(d)。Wilcoxon以此类推大写字母秩和检验，p< 0.07(绿色)所有NADP都有，p< 0.05(白色)NADPSP 606和也就是说的HD不都有在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR暗示，从分级门控，从所有HD(紫色)、所有SP(白色)和SP 606(绿色)联结，显示直方所示(e)和概要所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon以此类推大写字母秩检验

所示4 来自缓快方面的CD4+ treg新线粒躯操控畸变CD4+T新线粒躯的潜能减缓。SP第一组用白色的新线和橘色指出，HD第一组用灰色的新线和橘色指出，绿色的新线/橘色指出NADPsp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T新线粒躯来进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标示借助于为CFSE, Treg按仔细观察的数目硫酸铜。用抗CD3 /28微珠光阴化新线粒躯，培育借助于3翌日来进行流式新线粒躯心法测定。(a-d)与CD4+需要的话者相比之下应该的treg培育借助于(诱导)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培育借助于。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE游离总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的游离总和。用作不同之处性对照(激光阴的响应该新线粒躯另有treg)计算游离总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

所示5 畸变CD4+T新线粒躯对缓快方面的T新线粒躯光阴化的游离更加敏感。SP第一组用白色的新线和橘色指出，HD第一组用灰色的新线和橘色指出，绿色的新线/橘色指出NADPsp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T新线粒躯来进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标示借助于，treg按仔细观察的数目硫酸铜。用抗CD3 /28微珠光阴化新线粒躯，培育借助于3翌日来进行流式新线粒躯心法(CD25反染)和新线粒躯因弟归纳。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者都由培育借助于。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE游离花红(b)。(c,d) CD25游离花红(c)和CD134游离花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育借助于中都的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

论证：我们得借助于的论证是，来自缓快方面弟的光阴化失忆CD4+Treg在GITR暗示中都得到了拓展和比较丰富，强调了不足之处归纳Treg在1M-高血压风险社会阶层中都的异质性的不足之处。

原文借助于处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28